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膠原酶 I產品類型豐富，現貨供應

產品簡介

膠原酶（collagenase）是一種蛋白水解酶，常用來消化細胞外基質蛋白。作為一種肽鏈內切酶，膠原酶特異性識別Pro-X-Gly-Pro序列（高頻次出現在膠原collagen，很少出現在其他蛋白質中）并切割氨基酸（X）和甘氨-酸（Gly）之間的肽鍵。商業化膠原酶來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum）,是一種酶粗提物，因其所含組分不同分為I型膠原酶、II型膠原酶、III型膠原酶、IV型膠原酶、V型膠原酶等，根據其組分及降解特性又不同的用途。

I型膠原酶含有相對均量的多種酶活（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白-酶等），通常用于上皮組織、肝、肺、脂肪和腎上腺組織的原代細胞制備。

II型膠原酶含更高的梭菌蛋白酶活性，通常用作心臟、骨、肝、胸腺、唾液腺及軟骨等組織的原代細胞制備。

III型膠原酶含較低的次級蛋白酶水解活性，常用于乳腺組織的原代細胞制備。

IV型膠原酶含較低的胰-酶活性，通常用于制備胰島細胞及髓系細胞。

V型膠原為部分純化型，含更高的膠原酶和酪蛋白酶活性，更低的胰-酶水平，適用于制備胰島。

使用說明

生化試劑的用法用量主要根據客戶的實驗目的和現有文獻或書籍中的實驗方法來決定，以下用途僅供參考。

1. 膠原酶儲存液的配制

向每管100mg的膠原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平-衡鹽溶液，含Ca2+、Mg2+），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成1g/ml（即1000×）的儲存液。然后用低蛋白結合性的0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。

使用前于冰上解凍，避免反復凍融。其用于組織和細胞分散的常用濃度為：0.5-2.5mg/ml，用于軟骨消化的常用濃度為1-2mg/ml，需要根據特定的實驗條件或者參考相應的文獻資料確定所需的佳工作濃度。

2．組織的分離

1）使用無菌手術刀或剪刀將組織切成3-4mm大小的組織塊；

2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數次；

3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；

4）于37℃孵育4-18h。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補充消化可以提高消化效率。

5） 已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼龍網篩篩得，收集備用。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續孵育；

6）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次；

7）細胞培養液重懸上述細胞，利用自動細胞計數器或其他方法計算活細胞密度；

8）于細胞培養皿上利用合適細胞培養基接種細胞。