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ELISA免疫測定，你學會了嗎？

ELISA**測定目的是？

1.測定體液中的各種蛋白質，包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等；

2.測定**，包括小分子量的甾體**等；

3.測定***和**；

4.測定病原體抗原，HBsAg、HBeAg等；

5.利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等；

ELISA**測定原理

①使抗原（或抗體）結合到某種固相載體表面，并保持其**活性；

②使抗原（或抗體）與某種酶聯結成酶標 抗原（或抗體），而且此酶標抗原（或抗體）既保留其**活性，又保留其酶活性；

③測定時將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或 抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開，結合 在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成比例；再加入酶反應底物后，底物被酶催化后變為有色產物，根據其顏色反應的 深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。

ELISA**測定步驟

1.　包被；

2.　加樣：加稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)；

3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘；

5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml；

6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值。

引起ELISA測定錯誤結果的原因

標本因素、試劑因素、操作因素。