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中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)產(chǎn)品更新

堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)是一類于哺乳動物組織內(nèi)廣泛分布的磷酸酯酶，其活性在pH 9.2~9.8范圍內(nèi)最佳。它主要存在于附睪上皮之靜纖毛、腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、肝的毛細(xì)膽管膜、微動脈和毛細(xì)血管動脈部之內(nèi)皮等物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜)，還可以出現(xiàn)在高爾基復(fù)合體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、腸上皮之溶酶體、吞飲小泡、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP) 采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法)，而不是采用金屬沉淀法來顯示其堿性磷酸酶的活性，它作用原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可以通過水解AB-BI磷酸鹽，從而釋放出萘酚與磷酸，前者與偶聯(lián)重氮鹽可以生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液專門用于骨髓細(xì)胞或血液涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位位于胞槳，呈藍(lán)色，結(jié)果比金屬鹽沉淀法更可靠。

操作步驟(僅供參考)：

(一)、涂片

1、通過NAP固定液固定，制備新鮮血液或骨髓細(xì)胞涂片，充分水洗。

2、滴加準(zhǔn)備好的NAP孵育液，孵育及水洗。

3、滴加甲基綠染色液或核固紅染色液復(fù)染。水洗、晾干后鏡檢。

(二) 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1、準(zhǔn)備其他容器或6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞，棄液，使用PBS清洗干凈。

2、使用NAP固定液或多聚甲醛進(jìn)行固定，PBS清洗。

3、滴加配制好的NAP孵育液，置于濕盒內(nèi)，避光孵育，PBS清洗。

4、加入甲基綠染色液或核固紅染色液復(fù)染。使用PBS清洗后鏡檢。

注意事項(xiàng)：

1、 應(yīng)使用新鮮，薄厚適宜的骨髓細(xì)胞或血液涂片，避免影響酶的活性應(yīng)當(dāng)及時(shí)固定。

2、 培養(yǎng)細(xì)胞染色操作過程中，為避免損傷或丟失細(xì)胞，清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微。

3、 NAP孵育液降低陽性強(qiáng)度或易失效，實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)應(yīng)即配即用，不宜長久放置。

4、 復(fù)染時(shí)，取甲基綠染色液或核固紅染色液二者其一。

5、 每次染色時(shí)，均應(yīng)準(zhǔn)備陽性對照片。

6、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。