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細(xì)胞鐵離子試劑盒檢測(cè)方法

描述：鐵是人體必需的元素之一，對(duì)人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用，血液中鐵的含量不足，就會(huì)造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細(xì)胞內(nèi)，各組織、器官包括各內(nèi)分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和肺組織內(nèi)含量較為豐富。成人體內(nèi)含鐵 3～5 克，大部分都以蛋白質(zhì)復(fù)合物形式存在，少部分以離子的形態(tài)存在。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細(xì)胞鐵離子，線性范圍 5~300uM。產(chǎn)品包括標(biāo)準(zhǔn)品和空白對(duì)照，本試劑盒可進(jìn)行 100 個(gè)樣品

的檢測(cè)。

原理：

鐵與蛋白結(jié)合成復(fù)合物，在酸性介質(zhì)中鐵從復(fù)合物中解離出來(lái)，再被還原劑還原成二價(jià)鐵，并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在 540-580nm 處可比色測(cè)定。

適用范圍：該試劑盒可用于培養(yǎng)細(xì)胞中鐵離子定量檢測(cè)。

用戶自備：4.5%KM溶液 5ml。

操作步驟：

1. 樣品準(zhǔn)備（以 24 孔板為例）：將含鐵元素 DMEM 培養(yǎng)過(guò)的細(xì)胞用冷的 PBS 2ml 洗兩遍，將 PBS 吸棄（若不馬上檢測(cè)可將其凍存于-20℃）。200ul/孔裂解液裂解細(xì)胞，置于搖床裂解 2h。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將 3mM 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為：300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設(shè)置 0 濃度對(duì)照反應(yīng)管。

3. 將緩沖液與 4.5%高KM溶液按 1:1 混勻，稱為混液 A。

4. 參考下表使用 1.5ml 離心管，設(shè)置空白對(duì)照管、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過(guò)高，用裂解液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

說(shuō)明：

1. 本試劑盒不受錳離子、鎂離子、鎳離子和鋅離子等的干擾。

2. 操作過(guò)程中，樣品與試劑等避免與鐵器接觸，以防污染。

3. 所測(cè)樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，應(yīng)稀釋樣品后重新測(cè)定。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作，檢測(cè)試劑有腐蝕性，請(qǐng)小心操

作，若不慎沾到皮膚上請(qǐng)馬上用清水沖洗干凈。

5. 該試劑盒僅供科學(xué)研究使用